鸡补体C3d抗血清的制备与应用

摘要：为探讨补体因子C3d在家禽健康诊断中的意义,将鸡补体因子C3d全长基因克隆到原核表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-C3d,然后将pET28a-C3d转化到大肠埃希菌BL21（DE3）并以IPTG诱导表达。表达产物采用氯化钾染色切胶法进行纯化,获得分子质量约35ku的C3d目的蛋白。将所得蛋白与弗氏佐剂制备疫苗免疫小鼠,制备抗鸡补体因子C3d血清。用制备的血清与重组杆状病毒表达的C3d蛋白进行Western blot和间接免疫荧光（IFA）鉴定血清的特异性。进一步应用该血清对不同健康状态的鸡血清进行C3d相关补体成份相对含量的检测。结果鸡补体因子C3d在大肠埃希菌中成功表达,纯化的C3d蛋白免疫小鼠后制备的抗血清经ELISA检测抗体效价达1∶256 000。Western blot和IFA结果显示,该血清能与重组杆状病毒表达的C3d蛋白发生特异性反应。临床应用试验表明,该血清不仅能用于检测不同健康状态鸡血浆中C3d的表达状况,还能用于ELISA检测不同鸡血清中C3d相关补体成分的相对含量差异。研究还证实鸡血浆中C3d相关补体成分的表达因机体免疫状态不同而存在差异,结果为了解C3d与鸡体健康状况之间的关系提供了依据。