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小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定
作者: 王艳红 ; 张波 ; 李波 ; 张蓓蓓 ; 于倩 ; 颜超 ; 华慧 ; 汤仁仙 ; 郑葵阳
关键词: 小鼠 肝内胆管上皮细胞 分离 鉴定 培养
摘要：为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞（MIBECs）分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清（FBS）和10ng/mL表皮生长因子（EGF）、肝细胞生长因子（HGF）和胰岛素转铁蛋白硒（ITS）的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d-7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。