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牛病毒性腹泻病毒1型和2型双重RT-PCR检测方法的建立
作者: 王克栋 [1,2] ; 熊浩 [1,2] ; 季新成 [2] ; 冉多良 [1] ; 彭武丽 [2] ; 于学辉 [2] ; 史茜 [2]
关键词: 牛病毒性腹泻病毒 GAPDH基因 基因分型 内标 双重RT-PCR
摘要:根据GenBank已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因1型和2型毒株的5 '端非编码区(5'-UTR)保守序列的差异,设计2对特异性引物,并以牛GAPDH基因为内标,设计1对特异性引物,建立牛病毒性腹泻病毒分型与内标三重RT-PCR检测方法.3对引物可分别扩增出的片段大小为127、94、152 bp,与预期大小相符.经反应条件优化,该方法的灵敏度为100 TCID50,与不加内标检测灵敏度相当.经临床样品检测验证,该方法具有较好的特异性和重复性,可用来对牛病毒性腹泻病毒分型进行快速准确的检测.
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