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H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
作者: 郭捷 [1] ; 谢芝勋 [2] ; 罗思思 [2] ; 刘加波 [2] ; 邓显文 [2] ; 谢志勤 [2] ; 庞耀珊 [2] ; 范晴 [2]
关键词: H1亚型AIV SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR
摘要：本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒（AIV）的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒。采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR（real-time PCR）标准曲线。敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9%和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰。在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA;特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出;重复性试验结果显示,组内变异系数小于1%。建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测。