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柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达
作者: 陈佳 [1,2] ; 戚南山 [2] ; 廖申权 [2] ; 吴彩艳 [2] ; 吕敏娜 [2] ; 李娟 [2] ; 吴玄光 [1] ; 孙铭飞 [2]
关键词: 柔嫩艾美耳球虫 二氢乳清酸脱氢酶 电子克隆 原核表达
摘要：二氢乳清酸脱氢酶（DHODH）是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库（www.sanger.ac.uk/projects/E-tenella/）,拼接注释了柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列。构建重组表达载体pColdⅠ-EtDHODH,进行原核表达。测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1 254bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45ku。本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础。