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伪狂犬病病毒EP0基因的克隆及原核表达
作者: 周慧英 ; 程艺 ; 孙磊磊 ; 王雨 ; 吉艺宽 ; 任涛 ; 琚春梅
关键词: 伪狂犬病病毒 EP0基因 GST标签 融合表达
摘要：为研究伪狂犬病病毒EP0蛋白与病毒粒子中其他蛋白的相互作用，应用PCR方法从伪狂犬病病毒基因组中扩增EP0基因的编码区并克隆至pMD18-T载体，构建重组质粒pMD～EP0；用EcoRI和NotI双酶切pMD-EP0，回收EP0基因，并将其亚克隆至pGEX-4T—1中．构建带有GST标签的重组质粒pGEX—EP0；重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），经IPTG诱导后，通过SDS—PAGE和Westernblot检测其表达情况。结果表明，扩增到EP0基因的编码区序列大小为1227bp；重组表达菌经诱导后，EP0融合蛋白获得了表达，大小约71．4ku，且能与伪狂犬病病毒EP0单克隆抗体发生特异性反应。该蛋白的成功表达为进一步研究EP0蛋白与宿主细胞及病毒粒子中其他蛋白的相互作用奠定了基础。