一株口蹄疫病毒非结构蛋白3A单克隆抗体的表位肽段鉴定

摘要：为鉴定口蹄疫病毒非结构蛋白3A的单克隆抗体3A24#识别的表位区,对非结构蛋白3A分两个肽段进行原核表达,其中3A1和3A2肽段分别包含3A蛋白的第1位~89位和77位~153位氨基酸。分别针对两肽段基因设计并合成引物,PCR扩增后定向克隆到原核表达载体pET-30a（＋）-PES-SUMO,将重组质粒转化宿主菌E.coli BL21（DE3）pLys,IPTG诱导表达。用单克隆抗体3A24#对表达的3A1和3A2肽段进行Western blot检测,以鉴定单克隆抗体3A24#的识别表位肽。SDS-PAGE分析表明,成功表达了3A1和3A2肽段,大小分别为26ku和25ku。Western blot分析表明,FMDV牛阳性血清与两肽段均能识别,而单克隆抗体3A24#只能与3A2肽段发生反应,与3A1肽段不发生反应。3A24#单克隆抗体识别的抗原表位位于3A2肽段,即3A蛋白的第89aa~第153aa肽段上。