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猪衣原体实时荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
作者: 袁曾壮 [1,2] ; 王昱 [2,3,4] ; 聂福平 [2,3,4] ; 杨俊 [2,3] ; 李应国 [2,3] ; 肖进文 [2,3] ; 王国民 [2,3] ; 李贤良 [2,3] ; 刘力 [1]
关键词: 猪衣原体 实时荧光定量PCR TaqMan-MGB
摘要：为了建立猪衣原体（Chlamydia suis ）实时荧光定量 PCR（real-time PCR）检测方法，根据猪衣原体（C．cuis ）的 MOMP 基因，选取高度特异保守的区域，设计实时荧光定量 PCR 引物和探针，并构建了重组质粒。结果显示，该方法建立的标准曲线方程为：Y＝-3．2147x＋41．218，线性相关系数为0．9991，扩增效率为104．6％，最低检测量为1．7＆#215;102 copies ！μL。该检测方法特异性较好，与鹦鹉热亲衣原体、流产亲衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、牛羊亲衣原体、鼠衣原体无交叉反应。批内和批间重复试验的变异系数在0．458％～1．174％范围内，具有较好的重复性；与普通 PCR 方法相比较，该方法具有较高的检出率。建立对猪衣原体的监测和流行病学调查都具有非常重要的意义。