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羊口疮病毒陕西分离株B2L基因的克隆、序列分析及原核表达
作者: 何亚鹏 ; 张琪 ; 庞文静 ; 徐丽美 ; 付明哲 ; 许信刚
关键词: 羊口疮病毒 B2L基因 克隆 序列分析 原核表达
摘要：为了对羊口疮病毒（ORFV）陕西分离株B2L基因进行克隆、序列分析及原核表达，根据Gen—Bank已登录的ORFV（JN565694．1）B2L基因序列，设计合成一对特异性引物，应用PCR技术扩增0RFVB2L基因，并将目的基因连接到原核表达载体pET-28a中，成功构建重组质粒PET28a—B2L，转化大肠埃希菌BL21感受态细胞进行诱导表达，并进行SDS-PAGE和Westernblot分析。结果表明，成功克隆了OR—FV陕西分离株B2L全基因序列，核苷酸序列分析表明，陕西分离株B2L基因与国内外已报道的ORFV毒株核苷酸同源性超过97．3％，氨基酸同源性超过95．0％。重组菌经IPTG诱导后成功表达分子质量约为42ku的重组蛋白，该蛋白能与羊口疮阳性血清特异性结合，具有良好的反应原性。研究结果为ORFV的分子生物学特性研究提供资料，为进一步研制ORFV单克隆抗体及抗体检测ELISA试剂盒奠定了基础。