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山羊IFN-γ免疫血清制备及抗体ELISA检测方法的建立
作者: 刘鹤媛 ; 周铭 ; 岳进华 ; 张洪杰 ; 陈德坤
关键词: 山羊 rIFN-γ 免疫血清 酶联免疫吸附试验
摘要:摘要:为制备山羊干扰素-γ(IFN-γ)免疫血清并建立山羊IFN-γ抗体ELISA检测方法,以原核表达的山羊γIFN重组蛋白(rIFN-γ)为材料,免疫小鼠制备免疫血清;通过对测定不同的抗原包被浓度及包被时间,酶标抗体稀释度,免疫血清的孵育时间等条件的优化建立检测抗体效价的ELISA检测方法,并采用建立的方法测定免疫血清的抗体效价。结果显示,rIFN-γ抗原包被浓度为10μg/mL,4℃包被12h;酶标抗体稀释度为1:5000;免疫血清孵育时间为60min,可以得到最佳ELISA的检测结果。重复试验显示该方法变异系数(CV)在1.5%~5%之间。采用建立的方法测得免疫小鼠免疫血清效价为10^7。该ELISA检测方法灵敏高,稳定性好,为山羊IFN-γ抗体检测提供了技术支持。