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鸡三种天然免疫相关受体和配体荧光定量PCR检测方法的建立及应用
作者: 黄艳艳 [1,2] ; 高丹丹 [3] ; 许传田 [1,2] ; 朱曼玲 [1,2] ; 杨少华 [1] ; 黄庆华 [1,2] ; 张琳 [1,2] ; 张秀美 [1,2] ; 吴家强 [1,2]
关键词: 鸡 天然免疫 受体与配体 检测 实时荧光定量PCR
摘要:为建立检测鸡天然免疫相关受体(Ch-MDA5、Ch-TLR3和Ch-TLR7)及其相应配体(MAVS、TRIF和MyD88)的荧光定量PCR方法并评价其应用效果,设计和筛选特异性PCR引物,制备各基因的质粒标准品,绘制荧光定量PCR的标准曲线,并对方法的灵敏度、重复性和特异性进行检验。结果表明,所建立的检测方法敏感度高、特异性强、检测线性范围广、重复性好。应用建立的方法检测新城疫油乳剂灭活苗免疫SPF鸡后上述基因表达的变化,发现免疫后6h各基因的表达水平达到峰值,表明疫苗免疫迅速有效地激活了机体的天然免疫应答。建立了与鸡抗病毒感染天然免疫相关的3种细胞受体和相应配体的定量检测方法,可应用于病毒致病机制、鸡用新型疫苗、免疫增强剂以及抗病毒药物的研究与开发。
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