大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

作者: 张潇骏 [1] ; 王万能 [1,2] ; 周继红 [2] ; 刘钦 [1] ; 顾仕苓 [1] ; 周代君 [2] ; 邱俊 [2] ; 代维 [2] ; 袁丹凤 [2] ; 刘大维 [2]

关键词: 肺表面活性蛋白B 原核表达免疫印迹蛋白纯化大鼠

摘要：为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21（DE3）中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。

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大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

作者: 张潇骏 [1] ; 王万能 [1,2] ; 周继红 [2] ; 刘钦 [1] ; 顾仕苓 [1] ; 周代君 [2] ; 邱俊 [2] ; 代维 [2] ; 袁丹凤 [2] ; 刘大维 [2]

关键词: 肺表面活性蛋白B 原核表达 免疫印迹 蛋白纯化 大鼠

关键词: 肺表面活性蛋白B 原核表达免疫印迹蛋白纯化大鼠