牛源肠出血性大肠埃希菌的分离鉴定及进化分析

摘要：在牛群中分离肠出血性大肠埃希菌（EHEC）,并将分离菌株与国际上流行的EHEC 株之间的亲缘关系进行比较.应用PCR 方法结合头孢克肟-亚碲酸钾山梨醇麦康凯琼脂（CT-SMAC）平板分离法对采集的565份样本（牛粪便397份,牛奶99份,奶牛场环境中的水样69份）进行EHEC 分离和鉴定,在此基础上,对分离的菌株进行EHEC 相关毒力基因的检测及致Vero细胞毒性研究.根据大肠埃希菌MLST 数据库（http：//mlst.ucc.ie/mlst/mlst/dbs/犈.犮狅犾犻）提供的多位点序列分型（MLST）方案,利用MEGA5.0软件分别对分离菌株进行分子分型及遗传进化分析.结果从565份样本中共分离到EHEC40株,占分离样本总数的7.1% （40/565）.40株EHEC 涵盖了17种血清型,以O157（4/40）、O26（4/40）、O91（7/40）、O100（4/40）、O97（6/40）、O92（2/40）为优势血清型.对40株EHEC 进行相关毒力基因的检测发现,stx1、stx2、ehxA、saa基因检出率分别为82.5% （33/40）、75% （30/40）、90% （36/40）和27.5% （11/40）,远高于eae（5%,2/40）、wzxO157 （10%,4/40）基因检出率.38株携带stx1/stx2基因的EHEC 均能产生志贺毒素,且能致Vero细胞产生病变.MLST 分析表明,40株EHEC 共有7个序列型（ST）,其中ST297为优势序列型,占57.5% （23/40）.遗传进化分析表明,ST297型与国际上流行的EHEC 具有较近的亲缘关系.本次分离的40株EHEC 之间具有-定的分子多态性,与国际上流行的EHEC 具有较近的亲缘关系.除了O157EHEC 外,非O157EHEC 对人类公共卫生安全也可构成一定威胁,因此,我国应加强对这一类菌株的监测与检测.