鸡源致病性沙门菌多重PCR检测方法的建立及应用

摘要：为建立鸡源致病性沙门菌的快速鉴别检测方法,设计3对特异性引物,第1对扩增沙门菌属特异性毒力基因invA285bp片段,第2对引物扩增沙门菌鸡宿主特异性基因fliC 600 bp片段,第3对引物扩增沙门菌质粒毒力基因spvR507bp片段,经过对反应条件的优化,建立了检测鸡源致病性沙门菌的多重PCR 方法.该方法可以特异扩增携带毒力质粒的致病性鸡沙门菌,而与大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌、痢疾志贺菌及普通变形杆菌均无交叉反应;对沙门菌菌液的检出下限为4.5×10^2 CFU/mL,对重组质粒标准品的检出下限为1.67×10^3 拷贝/μL.应用所建立的方法对采集的223 份临床疑似病料进行检测,结果检出invA 基因阳性27份,占12.11 %,其中invA＋spvR 基因阳性19份,占8.52 %;invA＋fliC 基因阳性2份,占0.89 %;invA＋spvR＋fliC 基因阳性6份,占2.69 %.表明所建立的多重PCR 可用于鸡源致病性沙门菌的快速鉴别检测及流行病学调查.