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扇棘单睾吸虫Real-time PCR与常规PCR检测方法的建立
作者: 李树清 [1] ; 梅雪芳 [2,3] ; 林颖峥 [1] ; 石云良 [2,3] ; 黄腾飞 [4] ; 王巧全 [1] ; 张强 [1] ; 陈志飞 [1] ; 宋青 [1] ; 唐智芳 [1] ; 黄维义 [2,3]
关键词: 扇棘单睾吸虫 实时荧光定量PCR 常规PCR 鉴定
摘要：根据扇棘单睾吸虫核糖体DNA第一内转录间隔区（ITS1）序列,应用Primer premier 5.0软件自行设计一对可同时应用于real-time PCR和常规PCR的特异引物,建立real-time PCR与常规PCR鉴定扇棘单睾吸虫的方法,评估其特异性及灵敏性。应用建立的方法鉴定犬猫内脏中收集的吸虫,并用测序进行验证,检验方法的准确性和实用性。结果表明,建立的两种方法均只能特异性扩增扇棘单睾吸虫目的片段,不与横川后殖吸虫、钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、棘口属吸虫、背孔属吸虫、心形咽口吸虫、野牛平腹盘吸虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、异尖属线虫、宫脂属线虫发生交叉扩增;敏感性试验表明,real-time PCR和常规PCR检测扇棘单睾吸虫质粒的最低检测限分别为43拷贝和86拷贝。建立的realtime PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（R2=0.998）。鉴定来自犬猫的吸虫17条,结果显示两种方法均能准确鉴定出扇棘单睾吸虫。