犬副流感病毒分子克隆的构建及全基因组序列分析

摘要：为了解犬副流感病毒（CPIV）的基因组结构与遗传进化特征，应用RT—PCR分段扩增HRB—V毒株的5个片段，f1、f2、f3以及5′-末端和3′-末端，克隆到pHW2000栽体中并进行测序。经序列拼接获得全基因组序列，与OenBank登录的副流感病毒代表毒株进行对比分析。基因序列分析表明，HRB-V株基因组全长15246nt，含5′-末端、3′-末端和7个ORF具有副流感病毒基因组结构的典型特征；将结构蛋白F、HN以及全基因序列与参考毒株进行比较分析并做遗传进化树，结果表明，HRB—V与CPI一和CPI＋属同一分支，亲缘性相近。核苷酸以及氨基酸序列同源性分析结果表明，HRB-V与各病毒株的F基因的核苷酸同源性在96．5％～98．8％之间，氨基酸同源性为94．2％～98％；HN基因的核苷酸同源性在98．1％～99．5％之间，氨基酸同源性为97％～99．3％。以上试验证明副流感病毒人、猴、猪和犬sV5分离株基因差异较小，具有高度同源性。研究副流感病毒分子克隆的结构，为研究犬副流感病毒反向遗传操作技术平台奠定基础。