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携带PCV-2ORF2的感染性PRRSV克隆在Marc-145细胞表达的研究
作者: 郑海红 [1] ; 张可煜 [2] ; 周艳 [1] ; 袁世山 [1]
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 外源基因表达 遗传稳定性 删除外源基因机制
摘要：为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）删除外源基因的机制，以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作，构建在PRRSV全长基因组上同时包含其Nsp2区域缺失108nt及其ORF1与ORF2间插入猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2的全长cDNApDCPV，将pDCPV转染Marc-145细胞，获得拯救病毒vDCPV。鉴定vDCPV的遗传稳定性发现，vDCPV比先前发表的只在PRRSVORF1与oRF2间插入PCV-2ORF2获得的拯救病毒vCPV更具有遗传稳定性，这提示PRRSV删除外源序列的最主要机制是插入外源序列后导致基因组过长，由此可能影响N蛋白与基因组作用及其他结构蛋白包装过程。IFA结果显示，vDCPVP能微弱表达PCV-2cap蛋白。