猪A组轮状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者: 高婉俊 ; 王静 ; 林鸷 ; 曹伟伟 ; 张彦明

关键词: A组轮状病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR 猪

摘要：本试验旨在建立一种检测猪A组轮状病毒的SYBR Green工实时荧光定量PCR方法。参考GenBank上登录的猪轮状病毒OSU株的VP6基因序列保守区设计一对特异性引物，通过RT—PCR方法克隆目的基因，并将其连入pMD19-TVector，制备阳性标准品，优化反应条件。建立的方法在1．0×10^2～1．0×10^9拷贝／弘L范围内线性关系良好，反应扩增效率大于90％，扩增相关系数大于0．98。对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪圆环病毒2型均检测不到荧光信号，表明该方法特异性强。该方法批内和批间变异系数均小于2％，重复性好。结果表明，建立的sYBR Green I实时荧光定量PCR方法可为A组猪轮状病毒早期感染的诊断及病毒定量分析提供技术支持。

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