鸭新城疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

摘要：为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断，应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb／c小鼠，取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆，经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1。以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体，辛酸一硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体，HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体，建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果表明，当2C1包被量为4Ug／孔，鸭新城疫病毒1：10稀释，兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0．1肚g／孔，HRP标记的羊抗兔二抗1：10000倍稀释，每次作用时间为1h时，P／N比值最高，且阳性0D值最接近1．0。试验表明，该方法特异性好，不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应；可以检测出0．2Mg纯化病毒，比传统的HA试验的敏感性至少高64倍；批间和批内变异系数均小于10％。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础。