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丁型肝炎病毒ORF5基因片段的原核表达及在ELISA中的初步应用
作者: 王云龙 [1,2] ; 王娟 [1] ; 李玉林 [3] ; 董彩文 [3] ; 孙新城 [3] ; 张怡青 [1] ; 王国强 [3] ; 李恒思 [3] ; 刘旺根 [3]
关键词: 丁型肝炎病毒 丁肝抗原 原核表达 ELISA
摘要：为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入细胞BL21（DE3）,经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,表达蛋白分子质量约27ku,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达95%以上。将纯化的蛋白经HRP标记,初步建立ELISA捕获法,通过对24份标本检测和交叉反应试验,结果表明表达的抗原具有很好的反应原性和特异性,为建立丁型肝炎早期检测试剂盒提供材料。