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猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备
作者: 邓宇 [1,2,3] ; 蔺涛 [2,4] ; 孙春清 [2] ; 张宏彪 [2,4] ; 张荣 [2] ; 龙进学 [2] ; 黄律 [2] ; 文心田 [1] ; 曹三杰 [1] ; 童光志 [2] ; 袁世山 [2] ; 郑浩 [2]
关键词: 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 抗体制备
摘要：表达去除SD0803E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础。RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21（DE3）,IPTG诱导蛋白表达,以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。采用间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光等方法鉴定获得的抗体。结果显示,抗体效价最高可达1∶256 000;制备的抗体可与rsE2蛋白特异性结合;该抗体可特异性识别BVDV感染MDBK细胞表达的E2蛋白,显示抗体高度的特异性。成功构建pGEX-4T-1-sE2原核表达质粒,诱导其表达的蛋白免疫家兔,成功制备的猪源BVDV SD0803株E2抗体。