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猪日本脑炎病毒NS3蛋白的基因克隆、原核表达及纯化
作者: 韩秀杰 ; 张保新 ; 赵凡凡 ; 余风艳 ; 沈红霞 ; 王晓杜
关键词: 日本脑炎病毒 NS3 原核表达 纯化
摘要：提取猪日本脑炎病毒（JEV）上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增JEV的NS3基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28（a）上,酶切鉴定和PCR鉴定重组原核表达质粒pET-28（a）-JEV-NS3,转化大肠埃希菌BL21（DE3）菌株,IPTG诱导表达重组His-JEV-NS3蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,his-band试剂盒纯化重组蛋白。获得了1.8kb NS3基因片段,成功构建重组原核表达质粒pET-28（a）-JEV-NS3。IPTG诱导获得分子质量为64ku的His-JEV-NS3蛋白,该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的30%以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,其占总蛋白比例达70%以上。