副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用

摘要：针对副猪嗜血杆菌（Hps）16SrRNA序列和猪传染性胸膜放线杆菌（App）ApxIVA基因序列各设计一对引物,分别能扩增大小为822bp和346bp的目的基因片段,建立快速鉴定Hps和App的双重PCR方法。特异性试验表明,该方法对波氏杆菌、巴氏杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒2型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明 ,该方法与单项PCR的敏感性一致,最低可检测核酸浓度Hps 38pg/mL,App 3.8pg/mL;最低检测细菌含量Hps 8.9cfu,App 26.9cfu。利用该方法检测Hps和App参考菌株、临床分离株、36份临床肺组织样本和人工感染的猪肺组织样本。结果显示,该方法对参考菌株和临床分离株全部检出,36份临床样本中检出Hps 18份,App为阴性,与单项PCR检测结果一致,人工感染组织样本也均能检出。表明该方法适用于Hps和App的临床快速检测。