小鼠Bax基因实时荧光定量PCR标准品质粒的构建

作者: 潘博 [1,2] ; 蔡青 [3] ; 鲁强 [3] ; 付文卓 [3] ; 王继宏 [2] ; 潘耀谦 [1]

关键词: Bax基因实时荧光定量PCR 标准品质粒标准曲线

摘要：为了能够快速、准确定量小鼠Bax基因的mRNA,构建了小鼠Bax基因的标准品质粒和标准曲线。根据GenBank中小鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RTPCR技术扩增该基因162bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,提取质粒并进行酶切、测序鉴定;将阳性重组质粒10倍递减稀释作为标准模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立了Bax标准曲线及直线回归方程。结果表明产物熔解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数R2=0.999,表明线性关系好。本试验成功构建了目的基因Bax的标准品质粒和标准曲线。

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小鼠Bax基因实时荧光定量PCR标准品质粒的构建

作者: 潘博 [1,2] ; 蔡青 [3] ; 鲁强 [3] ; 付文卓 [3] ; 王继宏 [2] ; 潘耀谦 [1]

关键词: Bax基因 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线

关键词: Bax基因实时荧光定量PCR 标准品质粒标准曲线