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miRNA-34c实时荧光定量PCR检测方法的建立
作者: 刘笙腩 ; 颜润川 ; 李玲玲 ; 张雅妹 ; 陈树林 ; 赵善廷
关键词: 实时荧光定量PCR miRNA-34c 颈环 退火温度 模板浓度
摘要：为建立稳定有效检测miR-34c的实时荧光定量技术体系，采用茎环结构法设计了反转录引物，并通过梯度浓度及梯度温度PCR法对miR-34c的最佳退火延伸温度和模板浓度进行了确定，最后通过实时荧光定量 PCR对miR-34c进行检测。试验成功建立了精确检测miR-34c的实时荧光定量技术体系，其中miR-34c最佳退火延伸温度为62．4℃及每个实时定量反应体系中 cDN A 对应的 RN A 量最适浓度为50 ng/μL ，并得到重复性高、特异性强的检测结果。该技术体系的建立不仅为检测miR-34c提供了精准便捷的方法，而且可为设计检测其他miRN A提供技术支持。