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维氏气单胞菌双基因PCR检测方法的建立
作者: 王惠 [1] ; 边宇 [1] ; 孟庆峰 [2] ; 杨滨僮 [1] ; 康元环 [1] ; 荆琦 [3] ; 单晓枫 [1] ; 钱爱东 [1]
关键词: 维氏气单胞菌 16SrRNA 核酸酶基因 聚合酶链反应
摘要：为了建立维氏气单胞菌双基因PCR检测方法，以维氏气单胞菌ATCC35624基因组DNA为模板，选取16 S rRNA和核酸酶基因为靶基因，设计2对特异性引物，建立维氏气单胞菌双基因PCR检测方法。验证方法的敏感性与特异性，同时应用该方法对模拟污染样本进行检测。检测结果显示应用PCR方法同时扩增出大小约880 bp和320 bp的DNA片段，通过序列比对分析，16 S rRNA基因片段、exu基因片段序列与GenBank中登录的维氏气单胞菌A T CC35624株的的同源性均为99％，方法的敏感性较高，能检测到的DN A浓度达到了1．58×10-4 ng/μL ，特异性较强，只有维氏气单胞菌标准株及分离株结果呈阳性；人工模拟污染试验显示，该方法的样本检出率达到了90％，高于细菌分离培养的检出率73．3％。建立的维氏气单胞菌双基因PCR检测方法可以克服传统生化鉴定的不足，为维氏气单胞菌的检测提供新的途径。