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小鼠SIGIRR基因重组腺病毒的构建及鉴定
作者: 梁晓华 ; 王艳 ; 田丰 ; 黄勋 ; 高坤祥 ; 李小飞 ; 姜涛
关键词: 单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR) 急性肺损伤 腺病毒载体 AdEasyTM Toll样受体(TLR)
摘要:拟构建小鼠SIGIRR基因重组腺病毒并进行鉴定,为SIGIRR在小鼠急性肺损伤预防及治疗方面的研究提供基础.利用AdEasyTM系统构建SIGIRR基因重组腺病毒,并检测SIGIRR mRNA及蛋白在感染细胞及组织中的表达.通过多次扩增后,大量制备高滴度腺病毒.结果表明,本试验成功构建了携带小鼠源性SIGIRR基因的重组腺病毒表达载体Ad-mSIGIRR,病毒感染滴度为5×10^10 pfu/mL,滴度符合下一步试验要求.Western blot和免疫组化方法分别检测到mSIGIRR在体内的高效表达,且经气管滴注感染小鼠后,不会引起正常小鼠肺组织发生病理变化.明确了SIGIRR基因的重组腺病毒可以在小鼠活体内使mSIGIRR过表达,且经气管滴注5×109pfu的病毒感染小鼠后,不会引起正常小鼠肺组织发生病理变化.
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