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产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达
作者: 邓光存 [1,2] ; 包少文 [1,2] ; 杨继辉 [1,2] ; 曾瑾 [1,2] ; 李武 [1,2] ; 刘晓明 [1,2]
关键词: 产肠毒素大肠埃希菌 耐热性肠毒素 黏附素 重组腺病毒载体
摘要:为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC) STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用Pac Ⅰ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&-PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定.结果显示,重组腺病毒Ad5 STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础.