产CTX—M和TEM型ESBLs耐药大肠埃希菌双重PCR检测方法的建立

摘要：近年来，由于抗生素滥用导致细菌产生耐药性的现象已经非常严重，而产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希茵耐药菌株的出现，已成为目前出入境食品安全检测的重点和难点。耐药大肠埃希菌ESBLs基因型有5种，其中产CTx—M和TEM两种基因型最为普遍。为了加强对产CTx—M和TEM两种基因型ESBLs耐药大肠埃希茵的检测，本研究在反复优化的基础上，建立了针对产CTX—M和TEM两种基因型ESBLs大肠埃希茵的快速检测方法。针对CTX—M基因型的PCR方法检测CTX—MESBLs型的灵敏度为10-5，针对TEM基因型的PCR方法检测TEMESBLs型的灵敏度为10-4，双重PCR方法检测对应基因型ESBLs灵敏度均为10-4。该方法特异性好，尚未发现假阴性和假阳性现象。采用建立的方法与VITEK-2细菌鉴定系统的鉴定方法和NCCLSMl00-S10推荐的检测方法同时对623份样品进行检测并比较，结果表明，共检出只含CTX—M型ESBLs的耐药菌株13株，检出只含TEM基因型ESBLs的耐药菌株1株，同时含有CTX—M和TEM两种基因型ESBLs的耐药菌株9株，检测结果与细菌分离鉴定结果一致。表明所建立的方法可为产ESBLs大肠埃希茵的快速准确检测提供有效的工具，能够满足产ESBLs大肠埃希菌快速、准确、有效的口岸检疫需求。