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禽呼肠病毒S1733株σNS单克隆抗体的制备及其特性鉴定
作者: 谢志勤 ; 谢芝勋 ; 刘加波 ; 庞耀珊 ; 邓显文 ; 谢丽基 ; 范晴 ; 罗思思
关键词: 禽呼肠病毒 σNS蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
摘要:用体外表达的禽呼肠病毒(ARV)dNs蛋白作为筛选抗原,筛选出σNS蛋白的特异单克隆抗体,并对制备的抗体特性进行鉴定。将纯化浓缩的禽呼肠病毒S1733毒株100μg免疫Balb/c小鼠,取四免后3d的鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA测定融合细胞分泌的抗体效价,阳性孔细胞经3次有限稀释法进行克隆,通过Westernblot、Dot—ELISA、直接免疫荧光试验、病毒中和试验等方法对获得的单抗特性进行检测。经σNS蛋白筛选和克隆成功获得1株杂交瘤细胞株SB2—1K3,该单克隆杂交瘤细胞株能稳定分泌抗禽呼肠病毒σNs蛋白的抗体,腹水抗体效价达10^5以上,与其他参试非禽呼肠病毒毒株没有交叉反应,具有良好的特异性;病毒中和试验证明其没有中和能力,可以用于禽呼肠病毒的特异性检测。
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