猪流行性腹泻病毒HB／FN株S基因的克隆、原核表达及免疫原性分析

摘要：根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒（PEDV）经典毒株的S基因序列并参照pMD19-T载体序列，设计了一对分别引入限制性内切酶BamH工和Xho I酶切位点的引物，PCR方法从猪流行性腹泻病毒HB／FN株中扩增得到一条1080bp的片段。将其连入pMD19-T载体中，经酶切鉴定并测序，测序结果和参考株S基因同源性高达100％。根据抗原性分析选择其抗原性较高的655bp基因片段分别插入到pET-28a（＋）、pET-32a（＋）、pGEX-6p-1中，构建3种不同的原核表达载体，经合适条件的IPTG诱导后sDS-PAGE分析，结果显示S基因在3种表达载体中均能表达，在pET-28a（＋）中表达量最高，表达产物分子质量约为25ku。利用His标签的特性对重组蛋白进行纯化，Westernblot证明蛋白可以与PEDV阳性血清产生特异性结合反应。用纯化的蛋白免疫小鼠，抗体检测显示S蛋白具有良好的免疫原性。