PCV-2ORF2和PRRSVGP5双基因共表达重组腺病毒的构建及小鼠免疫试验

摘要：为构建猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5双基因共表达重组腺病毒，将扩增的ORF2基因和GP5基因通过IRES元件串联，构建重组腺病毒穿梭质粒。然后用PmeI酶切穿梭质粒，使其线性化，将线性化质粒转化pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞，同源重组后筛选重组腺病毒质粒，经PacI酶切后转染293A细胞进行包装，获得重组腺病毒。PCR鉴定表明重组腺病毒含有ORF2和GP5基因，Westernblot检测结果表明oRF2基因和GP5基因在293A细胞内获得表达。重组腺病毒经293A细胞连续传30代，TcID稳定为10／mL。初步动物免疫试验结果表明，该重组腺病毒能够刺激机体分别产生PCV-2和PRRSV的特异性抗体免疫应答反应。该重组腺病毒可以作为PCV-2与PRRSV二联基因工程疫苗研究的候选毒株。