角蛋白19片段单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：为制备角蛋白19片段（CYFRA21-1）的单克隆抗体（mAb），采用间接 ELISA 方法检测免疫小鼠的抗体效价，融合、筛选、克隆化单克隆抗体，将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水，采用辛酸硫酸铵法、蛋白 A 柱纯化腹水抗体，以 SDS-PAGE 凝胶电泳、紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度；利用鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定；采用阻断 ELISA 法测定 mAb 的敏感性（IC50）。结果表明，筛选获得4株分泌角蛋白19片段 mAb 的细胞株，将4株细胞株2F9、3H5、7C3、6F11注入小鼠腹腔，分别获得效价为2．56×10^5、5．12×10×5、5．12×10×5、2．56×10×5的单克隆抗体，经纯化，抗体蛋白浓度为12．43 mg／mL～16．00 mg／mL，为 IgG1型抗体，其 IC50在1．03 ng／mL～1．53 ng／mL 之间。说明获得了4株分泌高效价 CYFRA21-1单克隆抗体的细胞株，为建立 CYFRA21-1的检测试剂盒奠定了基础。