马腺疫链球菌 FNE 基因的克隆及原核表达

摘要：采用 PCR 方法从马腺疫链球菌新疆分离株中扩增 FNE 基因片段，克隆至 pMD19-T 载体。利用分子生物学软件分析测序结果，将 FNE 截短基因亚克隆至原核表达载体 pET-30a 中，转化到大肠埃希菌（E．coli）BL21（DE3）感受态细胞，以 IPTG 诱导 FNE 重组蛋白的表达，用 SDS-PAGE 和 Western blot 法分析蛋白表达及其反应原性。序列分析显示，其与 GenBank 收录的马腺疫链球菌4047（登录号YP002747216）核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99％。采用 PCR 法扩增到675 bp 的 FNE 截短基因片段构建重组表达载体获得重组蛋白，经 SDS-PAGE 分析在46 ku 处出现明显条带，Western blot 分析显示具有反应原性。成功克隆和表达了马腺疫链球菌的 FNE 截短基因，为重组 FNE 蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。