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单细胞凝胶电泳检测南美白对虾冷冻精子的 DNA 损伤
作者: 杨春玲 ; 赵永贞 ; 彭敏 ; 陈晓汉 ; 李咏梅 ; 陈秀荔
关键词: 南美白对虾 精子 超低温冷冻保存 单细胞凝胶电泳 DNA 损伤
摘要：应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术检测南美白对虾冷冻精子的 DNA 损伤状况，以评价南美白对虾精子超低温冷冻保存的效果。对南美白对虾精子细胞进行预处理，在碱性电泳液中使核 DNA 双链解链变性后电泳，GelRed 染色液染色10 min 后，在荧光显微镜下随机观察50个左右的核 DNA，CASP 分析软件分析测量 DNA 迁移的各种参数，并按彗尾长度及荧光强度对 DNA 损伤划分等级。鲜精和各冻精组的SCGE 检测结果显示，随抗冻剂二甲基亚砜（DMSO）浓度的升高，彗星尾部 DNA 含量、尾长、尾距、Olive 尾距增大，彗星率及损伤系数也逐渐增大；鲜精基本无损伤，50 mL/L DMSO 为抗冻剂组基本为轻度损伤，100 mL/L 和150 mL/L DMSO 为抗冻剂组以轻度损伤和中度损伤为主，250 mL/L DMSO 组中度损伤和重度损伤的比例进一步增大，但完全损伤没有出现。分析认为，抗冻剂 DMSO 的浓度是影响冻后精子 DNA 损伤的主要因素。