红色原鸡IFN-γ基因的克隆及原核表达

摘要：应用能够选择性克隆同源双链DNA的方法（PCR＋1）从刀豆蛋白A诱导的红色原鸡外周血淋巴细胞中扩增γ干扰素（IFN-γ）编码区基因,双酶切后连接至克隆载体pUC18。以阳性质粒为模板扩增IFN-γ成熟肽基因,连接至原核表达载体pProEXTMHTb,筛选出阳性重组质粒HTb-IFN-γ；重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,采用PCR＋1方法扩增得到560bp IFN-γ编码区基因,成功连接至克隆载体并以此为模板扩增出473bp成熟肽基因,构建的重组表达质粒HTb-IFN-γ在BL21（DE3）中经IPTG诱导表达出分子质量约为21ku的IFN-γ。Western blot分析显示,表达的IFN-γ能够与抗IFN-γ多克隆抗体特异性反应,具有良好的免疫活性。