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猪瘟病毒荧光定量RT-PCR和RT-LAMP快速检测方法的建立
作者: 唐景峰 ; 周康平 ; 韩振伟 ; 王业富
关键词: 猪瘟病毒 荧光定量RT-PCR 环介导等温扩增技术
摘要:建立了应用TaqMan-LNA的荧光定量 RT-PCR和反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)技术检测猪瘟病毒(CSFV)的两种方法。根据对NCBI中CSFV E2基因序列进行分析,设计了CSFV E2基因的引物和探针,并以E2基因为模板构建了重组质粒。通过梯度稀释阳性标准品进行试验表明荧光定量 RT-PCR和RT-LAMP检测下限分别为102拷贝/μL和101拷贝/μL;特异性试验表明,两种方法对于其他5种病毒不能检出,具有良好的特异性。临床样本检测同样表明两种方法都具有良好的特异性和灵敏度。说明所建立的Taq Man-LNA荧光定量RT-PCR和RT-LAMP可应用于CSFV的检测。
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