猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM株Nsp2基因缺失片段的原核表达及免疫活性分析

摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）TJ 株在细胞克隆纯化后得到非结构蛋白2（Nsp2）缺失的致弱毒株TJM株，根据GenBank数据库中公布的PRRSV TJ株F3代全基因序列设计合成引物，采用 RT-PCR方法扩增了 PRRSV TJM 株缺失片段 dNsp2，利用原核表达载体 pGEX-6p-1构建重组质粒 GST-dNsp2，将重组质粒转入大肠埃希菌 BL21（DE3）中表达，获得了可溶性表达的融合蛋白（GST-dNsp2）。经亲和柱层析纯化后，得到纯化的GST-dNsp2蛋白，含量1．6 mg/mL。用PreScissionTM蛋白酶对融合蛋白GST-dNsp2进行解离，获得浓度为0．41 mg/mL的目的蛋白 dNsp2。对 GST-dNsp2及 dNsp2进行 West-ern blot鉴定，证明表达的蛋白具有良好的反应性。本研究获得的 GST-dNsp2及 dNsp2为 ELISA方法鉴别检测PRRSV TJ株与TJM株提供了基础资料。