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B型产气荚膜梭菌C58-1株ε毒素基因序列分析与可溶性表达
作者: 林初文 [1,2] ; 张松林 [2] ; 刘磊 [3] ; 马永彪 [2] ; 沈志强 [2,3] ; 韩文瑜 [1]
关键词: 产气荚膜梭菌B型C58-1株 ε毒素基因 表达 序列分析
摘要：利用PCR技术从B型产气荚膜梭菌扩增出ε毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收984bp的ε毒素基因片段,将其定向克隆在载体PET-32a中,获得重组质粒pETε984。将pETε984转化至受体菌BL21（DE3）中。重组菌株经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PACE分析。结果表明,重组目的蛋白在大肠埃希菌成功表达,融合蛋白大小为51ku,存在于细菌培养上清中,可溶性蛋白占菌体总蛋白相对含量的67.8%。序列分析表明C58-1株ε毒素蛋白序列与目前公布的所有B型和D型产气荚膜梭菌同源性均在99.7%以上,但ε毒素蛋白序列第321位出现了S→Y突变。研究结果为ε毒素蛋白的亚单位疫苗研究奠定了基础。