火鸡疱疹病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者: 刘杉杉 [1,2] ; 孙伟 [1] ; 闫敏鑫 [1] ; 黄秀芬 [1] ; 姜良 [1] ; 何诚 [2] ; 李永清 [1]

关键词: 火鸡疱疹病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR sorf1

摘要：针对火鸡疱疹病毒（HVT）特异性的sorf1区基因序列设计引物,建立检测HVT的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行检测。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好线性关系（r^2=0.99）,熔解曲线分析显示该PCR扩增具有良好的特异性、敏感性和重复性,试验表明该方法最低检测浓度为7×10^1拷贝/μL。利用该方法对野生型HVT和rHVT-pmpD-N在体内和体外的复制特性进行检测,结果表明重组后的HVT与野生型HVT的增殖速度基本一致。本试验建立的检测方法能够快速检测HVT,准确率高,特异性好,具有较高的灵敏度和稳定性,为监测HVT体内和体外的病毒含量和复制情况提供了一种有效的手段。

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