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LPS体外诱导PRP产生PGE2模型的构建及HPLC-FD的优化
作者: 朱翔宇 曹志方 杨雨辉 蔡熙姮 姜亚磊 陈涛 海南大学农学院 海南海口570228 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海南海口570228
关键词: 前列腺素E2 脂多糖 高效液相色谱 衍生化 荧光检测
摘要：为了研究花生四烯酸（AA）代谢拮抗剂筛选的新方法，通过模拟体内AA代谢产生前列腺素E2（PGE2）的过程，建立一种新的体外脂多糖（LPS）诱导高浓度血小板血浆（PRP）悬液中AA代谢产生PGE2的炎症模型，并对高效液相色谱一荧光衍生法（HPLC—FD）测定PGE2方法进行了优化。结果表明，经50℃水浴反应，衍生化程度最高，HPLC—FD检测最佳条件为柱温40℃、流动相为添加0．1％三氟乙酸（TFA）的水：乙腈（40：60），流速1mL／min，Brmmc-PGE2的保留时间为6．562min。体外模型试验中LPS＋AA诱导试验组（157．476±36．104）ng／mL，LPS诱导空白对照组（11．416±2．034）ng／mL，而AA底物空白对照组中未检测到PGE2。表明AA作为体外PGE2代谢模型的关键底物，在加入诱导物质LPS后，AA可大量代谢生成为PGE2。