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H5亚型和N6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立
作者: 何莹 谢芝勋 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 黄莉 邓显文 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 广西大学动物科学技术学院 广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室 广西南宁530001
关键词: 禽流感病毒 H5亚型 N6亚型 二重逆转录-聚合酶链反应
摘要：为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒（AIV）的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对H5N6亚型AIV特异性扩增出418bp和251bp目的片段,对H5Ny（y≠6）亚型AIV扩增出418bp目的片段,对HxN6（x≠5）亚型AIV扩增出251bp目的片段,对其他亚型和常见的禽病病原体均未扩增出目的片段;敏感性结果显示,该方法对H5亚型和N6亚型最低检测限为1.59×10^-5ng/μL。本研究建立的H5亚型和N6亚型AIV检测方法,具有特异性强,灵敏度高的特点,为H5亚型和N6亚型AIV临床检测以及防控提供了有效方法。
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