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猪6种常见病毒多重PCR检测方法的建立及应用
作者: 罗宁 [1,2,4] ; 王冬冬 [1] ; 杨宗统 [1] ; 孙举 [1] ; 徐守振 [1,3] ; 王守春 [2,4] ; 尹燕博 [1,3] ; 徐彪 [2,4]
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 猪细小病毒 猪巨细胞病毒 多重PCR
摘要:旨在建立一种可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)和猪巨细胞病毒(PCMV)的多重PCR检测方法。参考相关文献及序列比对结果设计6对特异性引物,建立了可同时检测以上6种病毒的多重PCR方法并应用此方法对临床病例进行了检测。结果表明,所建立的多重PCR方法灵敏度高,对6种病毒的最低核酸检测量分别为12.8Pg(PRRSV)、46Pg(CSFV)、16Pg(PRV)、23.5Pg(PCV-2)、72Pg(PPV)、8.6Pg(PC—MV),对猪流感病毒(SIV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)无特异性扩增。应用该方法对临床145份样品进行检测,总阳性率为83.45%,2种以上病毒混合感染阳性率为69.66%。说明所建立的多重PCR检测方法敏感,可用于猪群中上述6种猪病病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。
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