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BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立
作者: 刘晓乐 [1,2] ; 张敏敏 [1,2] ; 陈颖钰 [1,3] ; 胡长敏 [1,2] ; 陈焕春 [1,2] ; 郭爱珍 [1,3]
关键词: 双重PCR 检测方法 牛副流感病毒3型 牛病毒性腹泻病毒
摘要:参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10^-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。
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