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伪狂犬病病毒主要抗原表位基因KgE的表达及纯化
作者: 周松峰 [1,2] ; 吴健敏 [2] ; 关忠宜 [2] ; 廖文军 [2] ; 白安斌 [2]
关键词: 伪狂犬病病毒 KgE基因 原核表达
摘要：从伪狂犬病病毒（PRV）基因组中克隆出KgE抗原表位基因,并将其插入到原核表达载体pET-Trx中,构建了原核表达质粒pET-Trx-KgE,将pET-Trx-KgE转化至BL21（DE3）plysS中,在IPTG诱导下进行表达。SDS-PAGE分析表明,KgE基因在BL21（DE3）plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的32.8%,主要以包涵体形式存在,分子质量约为36ku。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达到99.2%。Western blot检测发现,表达的KgE蛋白能够与PRV高免血清发生特异反应,但与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等阳性血清不发生反应,表明KgE蛋白具有良好的抗原性。