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甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的初步建立
作者: 王云龙 [1,2] ; 周春峰 [1] ; 孙新城 [4] ; 李玉林 [3] ; 陈冬焕 [3] ; 李恒思 [3] ; 昌静峰 [3] ; 王国强 [3] ; 董彩文 [3,4] ; 刘旺根 [2,4]
关键词: 血凝素 甲型H1N1流感病毒 原核表达 双抗体夹心ELISA
摘要：建立甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法,通过优化IPTG浓度和诱导时间确定HA融合蛋白的最佳表达条件,并进行Western bloc和血凝试验鉴定。用纯化蛋白制备单克隆抗体,建立检测甲型H1N1流感病毒的双抗体夹心ELISA检测方法,对其交叉反应、符合率进行验证。结果表明,HA蛋白在BL21（DE3）中得到表达,主要以包涵体的形式存在,分子质量为64 ku,最佳诱导条件为IPTG终浓度0.2 mmol/L,诱导时间4 h。Western blot鉴定其与H1N1病毒有相同的抗原性,血凝试验表明无血凝活性。制备HA单抗并初步建立双抗体夹心ELISA检测方法,检测100份阳性PCR样本,符合率为96%。建立的夹心ELISA方法可用于H1N1亚型流感病毒的初步诊断。