牛γ干扰素基因的表达及其多克隆抗体的制备

摘要：为了获得牛γ干扰素表达产物及其多克隆抗体,利用分子生物学软件分析GenBank公布的牛γ干扰素的氨基酸序列,针对这一基因序列设计了一对特异性引物,并从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR扩增以及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠埃希菌x-LI Blue感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,经纯化后免疫接种小鼠,用ELISA测定小鼠血清中抗体效价。结果表明,RT-PCR扩增到510 bp的片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符。Western blot分析结果表明,重组蛋白能与His-tag的单克隆抗体反应,说明该蛋白具有良好的免疫活性。用ELISA测定小鼠血清的抗体效价均在1∶32 000以上,说明该蛋白免疫效果较好,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。