大肠埃希菌PCR检测方法的建立及应用

摘要：本研究建立了一种快速诊断动物大肠杆菌病的PCR检测方法,与传统的细菌分离培养、生化鉴定方法相比较有效缩短了检测时间,提高了检测效率,同时为大肠杆菌病的快速诊断和流行病学调查提供了有效的技术手段。通过对大肠埃希菌ECs1048基因序列分析,利用Premier5.0软件设计并合成了1对特异性引物,建立了检测大肠埃希菌ECs1048基因的PCR检测方法。通过反复试验确定本方法的最佳退火温度为56℃。灵敏性试验和特异性试验表明本方法能够检测出的最低菌悬液浓度为1.5×10^2 CFU/mL,并具有较高的特异性。稳定性与重复性试验表明本方法具有良好的稳定性。利用本方法对临床样品的检测结果与生化试验鉴定结果的符合率为100%。本研究建立的检测方法灵敏性高、特异性强、稳定性好,可应用于动物大肠杆菌病的诊断。