猪细小病毒VP2的原核表达与多克隆抗体制备

摘要：克隆猪细小病毒（PPV）VP2基因全长1740bp，构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化，接种家兔制备多克隆抗体。用PCR方法扩增PPVVP2全长基因，扩增产物克隆至表达载体pET-32a并转化至E．coliBL21（DE3）感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG浓度、温度诱导表达VP2重组蛋白，经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后，采集血清制备抗体。PCR扩增得到1740bp的VP2基因片段；构建原核表达载体pET-32a—VP2，经37℃，IPTG浓度1．0mmol／L诱导表达4h可得分子质量大小约为82ku目的蛋白；间接ELISA检测抗体效价可达1：12800；Westernblot证明所制备的抗体能够有效的应用于PPVVP2抗原的检测。本研究成功构建了表达PPVVP2基因的原核载体，获得了VP2蛋白，制备了兔抗多克隆抗体，为建立检测PPVVP2蛋白ELISA方法奠定了基础。