西方马脑炎病毒TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者: 郑小龙 ; 王群 ; 邓明俊 ; 张晓文 ; 孙明君 ; 朱来华

关键词: 西方马脑炎病毒 TAQMAN MGB 荧光定量RT-PCR

摘要：通过RT-PCR从西方马脑炎病毒（WEEV）中扩增得到1 317bp特异的保守序列,将其克隆到pMD-20T载体中,进行体外转录,制备标准品cRNA。以10倍比稀释的cRNA为模板,进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立了WEEV荧光定量RT-PCR检测方法。对建立的方法进行了特异性和敏感性试验。结果表明,建立的荧光定量RT-PCR方法最低可检测10拷贝的cRNA;且与马鼻肺炎病毒（EHV-1）、马动脉炎病毒（EAV）、马流感病毒（EIV,H3N8）、西尼罗病毒（WNV）、东方马脑炎病毒（EEEV）和日本脑炎病毒（JEV）不发生交叉反应。与常规RT-PCR相比,该方法更加快速,特异性和敏感性更高,灵敏度为常规RT-PCR方法的100倍。

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